高通量測(cè)序技術(shù)(High-throughput Sequencing)是一次并行對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定,又稱下一代測(cè)序技術(shù)(Next-Generation Sequencing)、二代測(cè)序技術(shù),其使得可對(duì)一個(gè)物種的基因組和轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行深入、細(xì)致、全貌的分析,所以又被稱為深度測(cè)序(Deep Sequencing)。
第二代測(cè)序技術(shù)的核心思想是邊合成邊測(cè)序(Sequencing By Synthesis),即通過(guò)捕捉新合成的末端的標(biāo)記來(lái)確定DNA的序列。
文庫(kù)構(gòu)建:文庫(kù)構(gòu)建即為測(cè)序片段添加接頭。無(wú)論是PCR產(chǎn)生的片段還是基因組鳥(niǎo)/槍法打斷的片段都具有特異性(PCR中不同樣品反向引物插入了特異性的barcode,因此兩端也是特異的),兩端缺乏必要的引物因此混合DNA/片段不能直接擴(kuò)增和測(cè)序。DNA/片段需要加接頭修飾才能進(jìn)行上機(jī)測(cè)序,這個(gè)過(guò)程稱為二代測(cè)序的文庫(kù)構(gòu)建。
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